Et nyt co-kultur-assay til vurdering af antitumor CD8 + T-celle-cytotoksicitet via luminescens og flerfarvet flowcytometri
T-celleimmunoterapier har vist stort løfte hos patienter med avanceret kræftsygdom, hvilket revolutionerer behandlingen. T-celle-cytotoksicitet er afgørende for dets effektivitet, og derfor er udvikling af ex vivo-metoder, der tester tumor- og T-celle-interaktioner, afgørende. Der er gjort en øget indsats for at udvikle samkulturanalyser med sofistikerede materialer og platforme, der sigter mod at efterligne tumormikromiljøet (TME), men dets kompleksitet gør det vanskeligt at udvikle den ideelle model.
I denne undersøgelse udviklede vi et simpelt co-kultur-assay, der kan reproduceres i ethvert laboratorium, men med respekt for TME’s multicellulære natur. Vores mål er at kombinere i en enkelt analyse veletablerede teknikker såsom et luciferase-assay til målcelle-levedygtighedsanalyse, et CD107a-degranuleringsassay og flerfarvet flowcytometri til påvisning af cytokiner og cytotoksicitetsmarkører.
Cellesuspensioner af hele milter og tumorer indeholdende milt- eller tumorinfiltrerende effektor T-celler fra mus, der bærer Lewis lungecarcinom (LLC) eller CT26 coloncarcinomtumorer behandlet med stråling alene eller i kombination med immunterapier blev anvendt til co-kultur. LLC og CT26 cellelinier transduceret med firefly luciferase genet blev anvendt som målceller.
Vi demonstrerede, at splenocytter og tumorinfiltrerende T-celler afledt af mus behandlet med kombinationsbehandling var i stand til at dræbe ca. 50% af målceller efter 48 timers co-kultur. Denne effekt var tumorcellespecifik og afhængig af CD8 + T-celler påvist ved in vitro CD8 + T-celleudtømning.
Flowcytometri demonstrerede øget ekspression af CD107a og produktion af granzyme B, IFNy og TNFa af CD8 + T-celler. Vores samkulturanalyse er derfor velegnet som bevis for princip til in vivo terapeutiske studier, der tester immunterapier, og specifikt til at vurdere inddragelsen af cytotoksiske CD8 + T-celler i behandlingsrespons i LLC- og CT26-tumormodeller.
Vi foreslår også denne analyse som en ex vivo-platform til screening med højt gennemløb af immunmodulerende midler, der skal testes i disse to murine tumormodeller. Denne analyse kan tilpasses andre tumormodeller efter optimeringer.
Korrektion til: Ekstracellulære vesikler fra humane mesenkymale stamceller fremskynder kondrogenese i 3D-degenerative humane degenerative diskcellekulturer
Modulerende virkning af Vibrio cholerae toksin co-reguleret pilus på muciner, toll-lignende receptorer og NOD-gener ekspression i co-kultur model af Caco-2 og perifere mononukleære blodceller (PBMC) Vibrio cholerae, det forårsagende middel til kolera, har tendens til at kolonisere tyndtarmen som et gram-negativt patogen.
Tarmslimlaget danner den fysiske mucinbarriere, bestod af proteiner med høj molekylvægt. Med hensyn til rollen som toksinkoreguleret pilus (TCP) som en af de vigtigste koloniseringsfaktorer for V. cholerae, blev denne eksperimentelle undersøgelse designet til at bestemme TcpA’s rolle i induktion af mucinproduktion og dens regulerende effekt på medfødte immunitetsmolekyler inklusive vejafgift lignende receptorer (TLR’er) og nukleotidbindende oligomeriseringsdomæneholdige proteiner (NOD’er) ved anvendelse af Caco2-PBMC-samkulturer som en interaktiv model.
RTcpA-proteinet fra V. cholerae blev udtrykt i BL21 Escherichia coli, oprenset ved anvendelse af Ni-søjlekromatografi og bekræftet ved western blotting. Ikke-toksiske doser af rTcpA blev bestemt på Caco-2-cellelinier, og forskellige koncentrationer af rTcpA (1, 5, 10 og 50 μg / ml) viste en statistisk signifikant virkning på ekspressionen af muc-gener (MUC3 og MUC4) i en dosisafhængig måde.
Dette fund formodes at lette fysisk adhæsion og kolonisering af V. cholerae i tarmlumen. RTcpA stimulerede moderat ekspressionen af tlr4 og overudtrykt tlr1, som begge formodes at inducere et slimhindebeskyttende respons mod bakteriel infektion.
NOD2 blev signifikant øget, hvilket antyder, at det kan bidrage i proinflammatoriske reaktioner observeret i kolerasygdom. Der blev ikke set nogen ændring i NOD1-ekspression, som kan tilskrives den ikke-invasive natur af V. cholerae som et tarmpatogen. Afslutningsvis viste rTcpA-proteinet fra V. cholerae en statistisk signifikant modulerende virkning på det humane tarmepitelelekspression, som ville hjælpe med at love beskyttelse i profylakse-applikationer.
pharmacodane
Clofazimin er en bredspektret coronavirusinhibitor, der modvirker SARS-CoV-2-replikation i primær human cellekultur og hamstere
COVID-19-pandemi er det tredje zoonotiske coronavirus (CoV) -udbrud i århundredet efter svær akut respiratorisk syndrom (SARS) i 2003 og Mellemøsten respiratorisk syndrom (MERS) siden 2012. Behandlingsmuligheder for CoV’er mangler stort set. Her viser vi, at clofazimin, et lægemiddel mod spedalskhed med en gunstig sikkerheds- og farmakokinetikprofil, har pan-coronaviral hæmmende aktivitet og kan antagonisere SARS-CoV-2-replikation i multiple i vi
Quercetin muliggør den respektive cytotoksiske aktivitet af gemcitabin eller doxorubicin på 3D-kultur af AsPC-1- eller HepG2-celler gennem inhibering af HIF-la og MDR1
Virkningen af kræft på levetiden stiger markant over hele verden. Forbedret aktivitet af lægemiddeludstrømningspumper og forekomsten af tumormikromiljøet, såsom tilsyneladende en hypoxisk gradient inde i bulktumoren, er de vigtigste årsager til kemoterapisvigt.
Eksempelvis har ekspression af hypoxia-inducerbar faktor (HIF-1α) været forbundet med metastase, resistens over for kemoterapi og reduceret overlevelsesrate. En af de nuværende udfordringer for at bekæmpe kræft er derfor at finde nye molekyler med terapeutisk potentiale, der kan overvinde denne kemoresistens. I denne undersøgelse fokuserede vi på den bioaktive plante flavonoid quercetin, som har stærke antioxidanter og anti-proliferative egenskaber.
Vi undersøgte effekten af kombinerede behandlinger af quercetin og anticancermedicinerne gemcitabin og doxorubicin, der vides specifikt at virke på humane bugspytkirtelceller henholdsvis levercancerceller. Desuden havde vores undersøgelse til formål at undersøge mere dybtgående implikationen af multidrugs-transportøren MDR1 og HIF-1a n kemoresistens, og hvis quercetin kunne påvirke aktiviteten af lægemiddeludstrømningspumperne og de hypoxi-associerede virkninger.
Vi observerede, at lægemidlerne mod kræft var mere effektive, når de blev administreret i kombination med quercetin, som det fremgår af en øget procentdel af døde celler op til 60% i både 2D- og 3D-kulturer. Derudover viste vores resultater, at kombinationen af anticancerlægemidler og quercetin nedregulerede ekspressionen af HIF-1α og øgede ekspressionsniveauerne af regulatoren af apoptose p53.
Desuden observerede vi, at quercetin kunne hæmme udstrømningsaktiviteten af MDR1. Endelig antyder vores in vitro-undersøgelse, at effektiviteten af den kemoterapeutiske aktivitet af kendte anticancerlægemidler kan øges signifikant efter kombination med quercetin.
Dette flavonoid kan derfor være et lovende farmakologisk middel til hidtil ukendt kombinationsbehandling, da det muliggør den cytotoksiske aktivitet af gemcitabin og doxorubicin ved at målrette mod kemoresistensen udviklet af henholdsvis pancreas- og levercancerceller.